分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發(fā)光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。常用的技術包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法。

    紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用于鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。朗伯一比爾（Lambert-Beer）定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理，其意義為：當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時,其吸光度A與吸光物質的濃度c及吸收層厚度b成正比，而與透光度T成比。

    紫外-可見分光光度法常用的定量方法是校準曲線法，即配制一系列濃度由小到大的標準溶液，分別測定出它們的吸光度（或透光率），以吸光度（或透光率）為縱坐標，濃度為橫坐標，計算標準曲線的回歸方程。用測定標準系列的操作條件測定待測物，測得的吸光度（或透光率）由標準曲線的回歸方程查出該樣品的濃度。

影響紫外-可見分光光度法檢測結果的主要因素有：

    1.檢測人員：樣品前處理、檢測等過程操作規(guī)范且準確（試劑稱量、溶液配制、試液移取等），實驗數(shù)據(jù)轉移、計算等處理過程準確無誤。

    2.儀器：選用的紫外-可見分光光度法計工作正常，合適的測量條件（如波長、狹縫寬度等）；比色皿（池）潔凈程度，參比溶液的選擇，樣品測試吸光度范圍等。

    3.試劑、耗材和用水：選用的試劑純度、保存條件應滿足方法要求；樣品空白應不含待測物或干擾成分，若含有待測物或干擾成分應滿足檢測方法的要求；實驗用水應符合GBT 6682-2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法的要求；標準溶液濃度的準確性（標準溶液來源、保存條件等應滿足要求且在有效期內）；所用量器（天平、容量瓶、移液管等）應準確等。

    4.方法：選用的檢測方法應符合要測定的對象（如待測物性質、待測物濃度范圍及取樣量、干擾及消除情況、存在狀態(tài)等）；顯色過程操作應正確（試劑加入順序、加入量等），顯色時間、顯色溫度等條件應符合檢測方法的要求，且在顯色的穩(wěn)定時間內完成檢測。

    5.環(huán)境條件：樣品保存條件應滿足方法要求，樣品保存期限在方法規(guī)定的時間內，樣品保存和檢測過程無交叉污染等。

    6.質量控制：檢測過程應采取有效的質量控制措施（如平行測定、加標、質控樣品測定等）。

    綜上所述，檢驗人員的操作，儀器、試劑和方法的適用性，環(huán)境條件等都會影響紫外-可見分光光度法的檢測結果，應合理利用這些因素可減小對檢測結果的影響進而提高檢測結果的準確性。

（檢驗分析中心  彭莉）